构建293T-KO-BRAF/293T-KO-CDKN2A基因敲除株

发布时间：

2023-07-21

来源：

jennio-bio

作者：

吉妮欧

阅读数：

构建293T-KO-BRAF/293T-KO-CDKN2A基因敲除株， 1、设计sgRNA-Cas9； 2、构建sgRNA-Cas9质粒； 3、用lipofectmine2000转染试剂将sgRNA-Cas9转染进293T细胞； 4、检测荧光率，对293T细胞单克隆后进行位置标记； 5、扩培后测序验证； 293T-KO-BRAF细胞：由比对图表明，基因组发生了一段缺失突变（140924549-140924567已缺失）。 293T-KO-CDKN2A细胞：由上图红色圈所示，基因组有一个碱基的插入突变。

1、设计sgRNA-Cas9；
　　2、构建sgRNA-Cas9质粒；
　　3、用lipofectmine2000转染试剂将sgRNA-Cas9转染进293T细胞；
　　4、检测荧光率，对293T细胞单克隆后进行位置标记；
　　5、扩培后测序验证；

293T-KO-BRAF细胞：由比对图表明，基因组发生了一段缺失突变（140924549-140924567已缺失）。

293T-KO-CDKN2A细胞：由上图红色圈所示，基因组有一个碱基的插入突变。

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