本试验建立一种新的JEV感染ICR乳鼠模型，为JEV发病机制研究和抗病毒药物研发筛选提供了有力工具
发布时间：
2022-08-11
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摘要
为建立可表现重症日本脑炎病毒（Japaneeeercephalitis vinus，JEV）感染中枢神经系统损害症状及病理表现的小鼠动物模型，以1日龄 ICR乳鼠为试验对象，通过皮下注射及腹腔注射方式感染，EV SA14株，观察记录乳鼠体重、临床表现、存活情况。感染第5天处死所有乳，采集脑、肺、脾、肝等4种组织，荧光定量PCR （qRT-PCR） 结合核酸电泳分析病毒感染情况，通过苏木精-伊红染色及免疫组化检测组织病理变化。结果发现，皮下感染和瘦腔感染乳鼠均于注射后第3天出现精神萎靡、嗜睡、运动功能障碍，症状逐渐加重，皮下注射感染动物模型临床状更明显。病理结果显示，乳鼠脑组织出现神经元坏死、炎症浸润现象，肺组织存在水肿充血、结构破坏。qRT-PCR产物核酸电泳显示，两种模型脑、肺、肺、肺、脾存在JEV复制，皮下注射感染模型肝组织存在病毒复制。本试验成功建立通过皮下注射感染JEV的ICR乳鼠模型，为研究卫V感染途径及发病机制奠定基础。
关键词
乙型脑炎病毒,动物模型,ICR小鼠,小鼠模型,模型小鼠
简介
日本脑炎（Japanese encephalitis，JE）是一种以库蚊为传播媒介，人类为终末宿主的人畜共患病JE的病原体日本脑炎病毒（Japanese encephalitisvirus，JEV）流行于东南亚和西太平洋地区，可对患者造成永久性中枢神经系统（central nervous system，CNS）损伤2-3。目前尚未研制针对JE的特异性治疗药物，对 JEV 感染症状仅能进行支持治疗。在我国，JEV已造成多次疫情，为社会公共卫生带来沉重负担。
目前，JEV感染小鼠模型常采用颅内、腹腔或结膜途径接种，使用C57BL/6、BALB/c及Swiss品系成年小鼠建模，用于研究JEV感染的分子机制5-7。相较于以上品系，ICR小鼠易繁殖、适应性强，重复性好，广泛应用于动物建模。同时，颅内及腹腔感染方式存在伤害大、致死性强等缺点，易造成实验建模失败。皮下感染可模拟由蚊虫叮咬造成的JEV感染发病过程，为发病机制探究、药物开发应用提供更好的研究条件。
有研究表明，与成年小鼠相比，乳鼠（21日龄）更易感染流感病毒园。新生1日龄乳鼠免疫力有限，通常需要数周至数月达到成熟，对JEV 易感冒。因此，本研究采用皮下注射及腹腔注射途径感染免疫系统尚未完全建立的1日龄ICR乳鼠，通过检测小鼠各组织病理变化及荧光定量PCR（qRT-PCR）产物核酸电泳结果，探究建立ICR小鼠的JEV 感染模型。
探讨
JE是亚洲国家病毒性脑炎的主要病因，30%～50% JE 患者可出现永久性神经系统损害，重症JE 病例死亡率高达30%【10】。自1949年报道第一例JE 病例以来，我国一直是JE在亚洲的高流行区，1971年大流行报告 JE 病例超过170 000 例，为公共卫生领域及社会稳定造成极大挑战略。因此，一种可以稳定模拟JEV感染机制，有效且可复制的动物模型对JEV的致病机制探究、药物研发具有重要意义.
理想的JEV感染动物模型应具有以下特点∶对病原体敏感，JEV可在模型体内完成侵染复制感染模型表现有典型的临床症状，如精神萎靡，嗜睡，驼背、毛皮皱折及后肢瘫痪病理结果可判定CNS损害程度。ICR小鼠作为常用实验动物，具有适应性强，体格健壮、繁殖力强、性格温顺、易于捕捉、成熟早、生长速度快、实验重复性较好的优点，广泛应用于感染病学、神经生物学、毒理学、药理学实验04.相较于腹腔注射，皮下注射方式具有出血少、药物吸收缓慢持久等优点.
使用1日龄ICR乳鼠建立JEV动物感染模型，使用皮下、腹腔2种注射途径感染乳鼠.结果显示，注射20μL病毒滴度为10^PFU/100μL的正V可引起1日龄乳鼠震颤、嗜睡、肢体麻痹等临床症状.与IP组对比，SC组乳鼠临床症状更为明显，易于判断JEV 侵染程度及感染状态从生长发育情况看，两种感染方式均造成乳鼠体重增长减缓。生存曲线表明，SC组存活率高于IP组，可在有效模拟感染进程的同时提供更多样本。HE染色及免疫组化显示，两种感染方式均造成乳鼠神经元坏死、炎症浸润，肺组织充血水肿，肝脏及脾脏存在巨噬、单核细胞免疫阳性偏号·脑组织病毒载量显示，皮下注射感染与腹腔注射感染乳鼠脑组织病毒载量显著高于对照组∶感染后第1、3、5天样本qRT-PCR产物核酸电泳显示，两种模型均可模拟JEV感染脑部发病过程，SC感染模型可更好模拟JEV在外周器官感染进程.
由此得出以下结论∶SC可更好地模拟自然条件下 IEV 感染进程， 综合考虑取材时间、感染方式、感染效果、实用性等问题，认为SC感染JEV所建立的ICR动物模型更具优势-综上，本试验建立一种新的JEV感染ICR乳鼠模型，为JEV发病机制研究和抗病毒药物研发筛选提供了有力工具.
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