通过慢病毒介导构建肿瘤抑制基因p53沉默人肺腺癌A549细胞模型，检测p53沉默后对人肺腺癌A549细胞自噬反应的影响
发布时间：
2022-07-07
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摘要
近年来研究发现，在肿瘤的发生发展中，p53作为一个肿瘤抑制基因，对于维护基因组和细胞稳态起着重要的作用。自噬作为一种细胞自我保护机制，能够在营养缺陷状态下，维持细胞的存活。自噬性细胞死亡与肿瘤发生发展也有着重要的联系团。研究发现，定位于细胞质的 p53通过转录非依赖方式抑制自噬，而定位于细胞核的 p53通过反式激活靶基因增强自噬。因此p53对自噬是一把双刃剑。但是迄今为止，还未明确 p53在人肺腺癌 A549 细胞中与自噬的关系，本研究通过慢病毒技术构建 p53沉默的人肺腺癌 A549细胞模型并且初步探索其与自噬的关系，从而为临床治疗肺癌提供新的思路。
目的
通过慢病毒介导构建肿瘤抑制基因p53沉默人肺腺癌A549细胞模型，检测p53沉默后对人肺腺癌A549细胞自噬反应的影响。
方法
利用 pCDH-MSCV-MCS-EF1-Pund 慢病毒载体构建重组质粒，将重组质粒和空载质粒转染 293T细胞，收集病毒液后，感染 A549细胞，构建沉默细胞模型。将空载质粒组和重组质粒组分别设置为对照组和实验组。利用Western blotting技术检测p53沉默效率和自噬相关指标p62和LC3。
结果
检测p53沉默人肺腺癌A549细胞模型构建成功；Western blotting结果显示，p53沉默下调 p62和上调 LC3，促进细胞自噬。结论 成功构建慢病毒介导的肿瘤抑制基因p53沉默人肺腺癌A549细胞模型，该细胞模型能够促进自噬的发生发展，可能为临床治疗肺癌疾病提供一种新的思路。
关键词
人肺腺癌A549细胞,细胞模型,p53,肺腺癌, 自噬
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