苍术酮对肝癌荷瘤小鼠肿瘤体积和质量的影响
发布时间：
2022-06-13
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摘要：
原发性肝癌是高病死率的恶性肿瘤之一，给世界各国人民的健康带来极大危害。我国是原发性肝癌的重灾区，患者数量和病死率均占世界前列。
目前肝癌治疗尚无特效药，基本采用综合治疗方案，早期以手术治疗为主，对无法手术或者不能耐受手术的，采用TACE、姑息治疗和综合对症处理，以此控制肿瘤生长和转移，延长患者生存期。肝癌是一种具有高转移潜能的恶性肿瘤，其复发和转移是大多数肝癌患者治疗失败和死亡的主要原因。上皮-间充质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）被认为是肿瘤细胞扩散的初始步骤，可导致恶性肿瘤的侵袭和转移，因此抑制肿瘤细胞EMT的发生对肿瘤的治疗具有积极意义。（推荐阅读：FAO大鼠肝癌细胞、Li-7人肝癌细胞、肝癌原位模型）
在肝癌的预防治疗中，从中医药宝库中发掘有效的辅助治疗方法，无疑是其发展方向之一。苍术为菊科草本植物茅苍术Atractylodes lancea（Thunb.）DC.或北苍术Atractylodes chinensis（DC.）Koidz.的干燥块茎，味辛、苦，性温，具有燥湿健脾、祛风散寒的功效，是临床许多中药方剂的重要组成部分。苍术酮是从苍术中分离得到的倍半萜类有效成分，现代药理研究表明，苍术酮具有保肝、抗病毒和抗肿瘤等多种药理活性。本课题组前期研究发现苍术酮可抑制肝癌HepG2细胞的增殖和迁移，诱导肿瘤细胞的凋亡。
本研究拟在既往研究基础上，通过在非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷小鼠（non-obese diabetes/server combined immune deficiency，NOD/SCID）小鼠左侧背部皮下种植HepG2细胞悬液的方法制备肝癌荷瘤小鼠动物模型，以进一步研究在此动物模型中苍术酮对肿瘤生长、EMT和凋亡的影响。
目的∶
研究苍术酮对肝癌荷瘤小鼠肿瘤生长、上皮-间充质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）和凋亡标志物表达的影响。
方法∶
在非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷（NOD/SCID）小鼠左侧背部，皮下种植100 μL的HepG2细胞悬液（1×10/只）。当注射位置肿瘤生长到50~100 mm?之后，将18只小鼠随机分成对照组、苍术酮低剂量组（低剂量组）和苍术酮高剂量组（高剂量组），每组6只。苍术酮溶于玉米油中，低、高剂量组分别按照5、10mg/kg剂量灌胃给药;对照组仅给予玉米油灌胃。每日1 次，共15d。实验结束后处死小鼠，采集肿瘤瘤体组织待测。部分肿瘤组织置福尔马林中固定，石蜡包埋切片，进行免疫组化染色，用于检测Ki-67。部分肿瘤组织进行裂解抽提总蛋白，采用BCA法测定蛋白浓度，10% SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，半干法转移至硝酸纤维素膜，Westerm Blot法检测EMT标志物（E钙黏蛋白、N钙黏蛋白、波形蛋白和α-SMA）、EMT促进因子（MMP-2、MMP-9和TIMP-2）和凋亡相关因子（Bcl-2、Bax和裂解Caspase-3）的蛋白表达水平。结果∶苍术酮治疗后荷瘤小鼠皮下肿瘤的体积和质量均明显下降，其作用呈现剂量依赖性。苍术酮组Ki-67阳性染色面积均显著缩小.尤其以高剂量组最为明显。
检测结果显示，苍术酮干预显著上调了上皮标记物（E钙黏蛋白）的表达，下调了间充质标记物（N-钙黏蛋白、波形蛋白和α-SMA）的表达;显著增加了TIMP-2的表达，降低了MMP-2和MMP-9的表达;降低了Bcl-2的表达水平，显著增加了Bax和裂解Capase-3的表达水平。
结论
苍术酮具有一定的体内抗肿瘤效应，可抑制EMT和降低MMP减少肝癌细胞迁移和侵袭，通过凋亡途径促进肝癌细胞的凋亡。
关键词
苍术酮;肝癌;荷瘤小鼠;上皮-间充质转化;细胞凋亡
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