比较不同血清型 AAV携带HBV基因组建立乙肝小鼠模型效果
发布时间：
2022-04-08
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摘 要∶
近年来，用8型腺相关病毒携带1.3拷贝 HBV（Hepatitis Bvirus）基因组建立的 HBV持续感染小鼠模型受到越来越多的关注。本研究比较了除 AAV8 之外的其他 4 种血清型重组腺相关病毒（Recombinant adeno-associated virus，rAAV）建立乙肝小鼠模型效果。
首先，将携带1.3拷贝 ayw 亚型HBV基因组的1型、2 型、5型、8型、9型腺相关病毒分别以1×10vg/只（Viral genome，vg）的剂量尾静脉注射C57BL/6J小鼠∶利用 ELISA 方法监测小鼠血清中HBeAg 和HBsAg 表达水平∶用定量 PCR方法检测小鼠血清和肝脏中 HBV DNA 拷贝数∶用免疫组化方法检测小鼠肝脏中 HBcAg 的表达∶用HE 染色检测小鼠肝脏病理变化。
结果显示，在持续8周中，5组小鼠血清中都检测到 HBeAg 和 HBsAg 的表达，血清和肝脏中均检测到HBV DNA的存在。HBeAg、HBsAg、HBV DNA表达水平高低依次为 AAV8>AAV9AAV1>AAV5>AAV2。5组小鼠用免疫组化方法都检测到肝脏中 HBcAg 表达，HE 染色病理检测均观察到不同程度的肝损伤。本研究扩大了能用于建立乙肝小鼠持续感染模型可选择的 AAV载体种类，发现虽然 AAV1、2、5、9的建模效果不如 AAV8，但它们都可以介导建立持续感染的乙肝小鼠模型，建模效果依次为 AAV8>AAV9AAV1>AAV5>AAV2。
其中 AAV9 介导的建模效果与 AAV8 载体最为接近，可以替代AAV8载体用于有效地建立 HBV持续感染的小鼠模型。
关键词∶ 动物模型，乙型肝炎病毒，AAV，持续感染
乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒（Hepatitis B virus，HBV）引起的、以肝脏炎性病变为主并可引起多器官功能障碍的传染病。世界范围内曾感染过HBV的人数约为20亿，慢性 HBV感染者有3.5亿，每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和肝癌（Hepatocellular carcinama，HCC。建立HBV感染的动物模型，对于探索乙肝感染发病机制、研究和筛选乙肝药物、寻找有效的防治方法，具有重要的意义。
HBV转基因小鼠模型一直是研究乙肝致病、致癌机制及抗 HBV药物研究的重要工具。但是，这种模型存在明显缺陷。其一，由于 HBV基因组 DNA是整合于模型鼠染色体中的，而不是存在于染色体外的 cccDNA（Covalently closed circular DNA）形式，与HBV病毒在人体肝脏的感染状况和复制模式有明显差异;其二，模型动物之间 HBV 抗原表达水平和血液中的HBV病毒载量的个体差异较大。因此有必要建立更好的 HBV感染动物模型。
2010 年董小岩研究组利用携带 1.3 拷贝HBV基因组的8型腺相关病毒（rAAV8-1.3HBV））成功建立了一种持续感染的HBV小鼠模型，并广泛应用于各种研究中。该模型不仅成模效率高，HBV感染维持时间长，而且具有可在肝细胞中形成类似HBVccDNA结构的特点，为HBV持续感染机制与抗病毒药物筛选等研究提供了新的动物模型。
AAV8可用于建立持续感染的 HBV 小鼠模型，但未曾有报道除AAV8以外其他血清型AAV 载体是否也能建立 HBV小鼠模型，以及建模的效果。为此，本研究制备 rAAV1-1.3HBV、rAAV2-1.3HBV、rAAV5-1.3HBV、rAAV8-13HBV、rAAV9-1.3HBV等5种病毒携带1.3个拷贝HBV 基因组的不同血清型 AAV病毒，通过尾静脉注射至免疫功能正常的 C57BL/6J 小鼠，研究除AAV8 外其他血清型 AAV 载体是否能够建立HBV 小鼠模型，若能建立 HBV 小鼠模型，则进一步比较各组小鼠建模的效果。
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