CORM-3通过调控巨噬细胞极化促进MC3T3-E1 小鼠胚胎成骨细胞成骨分化的研究

发布时间：

2022-04-01

来源：

专业提供(ATCC,DSMZ,RCB,JCRB细胞库源细胞、动物实验、CRO服务、SCI润色)

作者：

吉妮欧

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CORM-3可通过释放CO提高 HO-1的蛋白水平.促进巨噬细胞 RAW264.7细胞向 M2表型极化，增强 MC3T3-E1细胞的成骨分化能力

　　目的∶
　　研究一氧化碳释放分子-3（carbon monoxide releasing molecule-3，CORM-3）对巨噬细胞极化的调控作用，进一步探究CORM-3介导的巨噬细胞免疫环境对 MC3T3-El 细胞增殖和成骨分化的影响。
　　简介：
　　种植牙是牙列缺损和缺失的首选治疗方案。长期慢性炎症和外伤导致不同程度的骨缺损，这对口腔种植技术的操作和修复效果提出巨大挑战。因此，增加种植术区的骨量和促进骨改建是口腔种植修复的重要难题。研究发现巨噬细胞参与的免疫反应与骨再生修复具有非常密切的联系，由此提出的骨免疫的研究理念是关注生物材料对骨缺损区巨噬细胞的调控，通过增加 M2 表型的转换，改善免疫微环境，促进缺损区骨组织修复重建。
　　研究表明，一氧化碳（CO）具有细胞保护、抗炎和促进细胞增殖的作用，一氧化碳释放分子（carbon monoxide releasing molecules，CORMs）作为一种外源性CO供体，具有一定程度的靶向性，其中一氧化碳释放分子-3（carbon monoxide releasing molecule-3，CORM-3）是最早用于研究的水溶性CORMs。目前已有较多关于硫化氢气体分子在巨噬细胞活化和骨再生方面的研究，由于内源性气体信号分子具有一定程度的相似性，学者推测CORM-3在骨免疫调控中具有一定的研究价值。本文旨在探讨CORM-3 对巨噬细胞极化的调控，以失活组作为阴性对照，并建立共培养体系，探究CORM-3介导的免疫环境对 MC3T3-E1细胞增殖和成骨分化的影响。
　　方法∶
　　体外培养RAW264.7细胞，筛选可用的CORM-3浓度。RT-qPCR 检测iNOS、TGF-3、IL-10等 M1/M2相关基因的表达，免疫荧光染色检测各组血红素加氧酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）蛋白的表达。流式细胞术检测24 h 后各组 Ml/M2巨噬细胞的比例。收集 24h 后的上清液制备条件培养基，应用CCK-8、碱性磷酸酶染色和茜素红染色及RT-qPCR等检测 MC3T3-E1细胞的增殖和成骨活性。
　　结果∶
　　RT-qPCR 结果显示CORM-3促进了 TGF-β和 IL-10 的表达，降低了iNOS的表达（P<0.05），免疫荧光实验结果显示 CORM-3增加 RAW264.7 细胞 HO-1的蛋白表达，在CORM-3调控巨噬细胞的环境下，RT-qPCR结果显示CORM-3提高了 OCN、Runx2及Col-1等基因的表达（P<0.05），MC3T3-EI 的增殖和成骨分化增强。
　　结论∶
　　CORM-3可通过释放CO提高 HO-1的蛋白水平.促进巨噬细胞 RAW264.7细胞向 M2表型极化，增强 MC3T3-E1细胞的成骨分化能力。
　　关键词:一氧化碳释放分子-3;细胞极化;条件培养基;成骨分化