大黄素可通过抑制NF-B信号通路活化抑制类风湿关节炎滑膜细胞增殖和炎症反应

发布时间：

2022-03-23

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大黄素可能通过抑制 NF-B信号通路的活化抑制HFLS-RA 类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和炎症反应。

　　目的
　　探讨大黄素对TNF-α诱导的HFLS-RA人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响。方法将人类风湿关节炎成纤维样滑膜 HFLSRA 细胞随机分为对照组（未处理）、诱导组（TNF-α处理）、25 μmol/L 大黄素组（TNF-α和大黄素处理）、50 μmol/L大黄素组（TNF-α和大黄素处理）和100 μmol/L大黄素组（TNF-α和大黄素处理）。采用 MTT法和克隆形成实验检测细胞的存活率和克隆形成率，流式细胞仪检测细胞的凋亡率，RT-PCR 检测凋亡相关基因 Bcl-2 和 Bax mRNA的表达，ELISA 检测细胞上清液中IL-6和IL-β 水平，Western blot 检测细胞中 NF-B信号通路相关蛋白 p-HkBα和 p-NF水B p65的表达。
　　结果
　　1.大黄素对 HFLS-RA 类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响 MT检测结果显示，与对照组比较，诱导组细胞的存活率升高（P<0.05）;与诱导组比较，25、50、100 wmol/L 大黄素处理组细胞的存活率下降（P<0.05）。同时，克隆形成实验结果显示，诱导组细胞的克隆形成率较对照组升高（P<0.05）;而给予25、50、100 μmol/L大黄素处理后，HFLS-RA细胞的克隆形成率较诱导组均降低（P<0.05）。随着大黄素浓度的增加，HFLS-RA细胞的存活率和克隆形成率越低。见表1。

　　2.大黄素对HFIS-RA 细胞凋亡的影响流式细胞仪（图 2）检测对照组、诱导组、25 μmol/L 大黄素组、50 μmol/L大黄素组和 100 μmol/L大黄素组细胞的凋亡率存在差异（P<0.05），与对照组比较，诱导组细胞的凋亡率降低（P<0.05）;与诱导组比较，25、50、100 μmol/L 大黄素组细胞的凋亡率均升高（P<0.05），且呈浓度依赖性。结果见图1、表1。

　　3.大黄素对HFLS-RA 类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡相关基因表达的影响RTPCR 检测结果显示，诱导组细胞中 Bcl-2 mRNA 的表达水平高于对照组（P<0.05），而 Bax mRNA 表达低于对照组（P<0.05）;随25、50、100 μmol/L大黄素浓度的升高，HFLS-RA 细胞中 Bcl-2 mRNA逐渐降低，而Bax mRNA表达逐渐升高，与诱导组比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表2。

　　3.4 大黄素对HFLS-RA细胞上清液中I-6和I-1β水平的影响与对照组比较，诱导组中 IL-6和Ⅱ-1β 水平升高（（P<0.05）;而大黄素组较诱导组降低（P<0.05），且大黄素浓度越高降低幅度越明显。见表3。

　　5.大黄素对HFLS-RA 类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中 NF-B信号通路的影响与对照组比较，诱导组细胞中 p-kBα 和 p-NF-B p65蛋白的表达升高（P<0.05）;与诱导组比较，25、50、100 μmol/L大黄素组细胞中 p-kBα和 p-NF+B p65 蛋白的表达下降（P<0.05），且呈浓度依赖性。见图2、表4。