吉妮欧类风湿性关节炎动物模型背景的建立模型详细介绍
发布时间：
2022-03-07
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类风湿性关节炎动物模型的建立
类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种以关节滑膜炎、破坏性关节病变为主要特征的慢性、自身免疫性疾病，致畸、致残率极高。（推荐阅读：类风湿性关节炎(RA)模型、MH7A类风湿关节炎滑膜成纤维细胞、HFLS-RA人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞）
其临床症状主要表现为全身关节肿胀、疼痛和运动失调等、病情及其严重的甚至可能导致残疾。
其基本病理改变是滑膜炎，急性期滑膜肿胀、渗出，中性粒细胞浸润；慢性期滑膜增生肥厚，形成血管翳；后者是造成关节破坏、关节畸形、功能障碍、使疾病进入不可逆阶段的病理基础。
发病机制
RA 是一种复杂的免疫性疾病，致病机理目前还没有完全了解。
目前多认为本病属于一种自身免疫性疾病，其始动因子尚不清楚，可能是感染因子（如病毒、支原体或细菌等）进入人体后，其所含某些成分（如寡糖或糖肽碎片）被关节内滑膜细胞摄取并组合到滑膜细胞所合成的蛋白多糖中，使其结构发生改变而具抗原性。
此外还和遗传因素有关，已发现 RA 的易感基因。
目的
为探明类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）的病因、病理学、免疫学、临床等方面的机制，寻找更有效的治疗 RA 的方案。
因此探寻一种与人类 RA 相似、容易建立、比较经济的并且能全面反映 RA 特点的动物模型是一种必要的手段
（一）佐剂诱导型（Adjuvant Arthritis, AA）（推荐阅读：佐剂性诱导节炎（AIA）啮齿动物模型）
AA 最早由细菌学家Freund 于20 世纪50 年代创立，又称为弗氏佐剂关节炎。通常用完全弗氏佐剂（CFA）作介导溶剂。
其机制是结核杆菌致关节炎抗原为 65 kD 热休克蛋白(HSP)，RA病人软骨内具有与 65kD HSP 相似的蛋白多糖桥联蛋白抗原成分，CFA 注入激活T细胞，激活T细胞参与 RA 发病机制。
（二）胶原诱导型（collagen-induced arthritis，CIA）（推荐阅读：胶原诱导关节炎（CIA）啮齿动物模型）
CIA 模型是由Trentham等于1977年首次建立的实验性关节炎动物模型。
Ⅱ型胶原蛋白与完全弗氏佐剂（CFA）混合至完全乳化，制备Ⅱ型胶原乳剂对动物进行免疫。
其建模机制是 50％的RA患者血清中存在有抗CⅡ的自身抗体，表明CⅡ可诱导体内产生关节炎性质的自身免疫反应。
（三）胶原抗体诱导型(CAIA)
抗Ⅱ型胶原单克隆抗体源自8周大的雄性DBA/1J 小鼠CIA 模型，这些抗体混合物注射到模型小鼠的关节腔后可直接作用于Ⅱ型胶原或其他在体内高表达的自身抗原，从而发挥免疫介导作用。
该模型的临床症状与CIA和RA很相似，突出特点是能在几天之内迅速发病，关节组织中巨噬细胞和多核型白细胞浸润。该模型很好的体现了外源性抗原抗体刺激体诱导的严重关节损伤。
Ⅱ型胶原乳剂制备
用高速匀浆机机器搅拌按照佐剂和胶原溶液（1：1），加入顺序是把水溶液加到油溶液中去，搅拌中逐滴加入。
模型构建成功展示
总结
为减少震荡过程中发热导致的胶原变性，可在管子外面再套一个装有有冰水混合物的管子。搅拌时间为2min左右。
胶原佐剂剂配成乳剂后一定要检测乳剂的质量，乳化后的胶原滴入水中不扩散才能进行免疫，如果滴入水中扩散说明乳化效果不好，影响造模效果。乳剂现配现用，乳剂保存时间不超过1小时。
足垫免疫
针头应插入足垫皮下指向脚踝方向：这样能够保证佐剂引流到淋巴结。30min内会看到严重的急性炎症反应，高峰期3-4天，通常情况下回持续20-25天。
免疫的后爪不能作为评分标准，因为即使其四肢都没有肿胀，免疫的后爪也会发生肿胀。
免疫后12-14天在未注射的爪子发生肿胀，高峰期2-3天，关节炎会持续20-25天。但是有一些大鼠会反生由骨膜反应引起的慢性骨性肥大。
尾根部免疫
2mg/ml的鸡II型胶原与含5mg/ml灭活结核杆菌完全弗式佐剂1:1乳化后，200ul尾根部皮内注射，21天后改用2mg/ml的鸡II型胶原与不完全弗式佐剂1:1乳化后尾根部皮内第二次注射100ul
模型构建成功展示
为进一步研究类风湿关节炎，建立可靠的模型是研究的关键，现在的RA模型
并不能全面的反应人类的临床症状，存在一定的差异性，现存的模型中胶原
诱导性模型和佐剂性模型相对可靠一些，有待于进一步的探讨。
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