293T人胚肾细胞起死回生之心得学会你在培养中将少走很多弯路

发布时间：

2022-01-24

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当细胞在细胞培养瓶内长满达到80％时就要传代，一传二，24小时后再传代。48小时传就不好了，如果在24小时后细胞没有长到80％，应该换新的培养基，不然，培养基变黄，细胞脱落

　　293T细胞起死回生之方法，详细讲解一下要点，分享一点心得，希望有用的上的少走一些弯路。
　　细胞传代：
　　当细胞在细胞培养瓶内长满达到80％时就要传代，一传二，24小时后再传代。48小时传就不好了，如果在24小时后细胞没有长到80％，应该换新的培养基，不然，培养基变黄，细胞脱落。
　　细胞消化：
　　将细胞培养瓶竖立放置，吸走培养基，如果培养基中的脱落细胞较多，说明细胞现在很容易脱落，只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%)，来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落，加入10mlMEM(10%杭州四季青胎牛血清），混匀，不能吹打，分装2瓶，如果细胞没长满就脱落，则只需加入5mlMEM，不分装。如果培养瓶中的细胞贴壁较牢固，培养基上清没有细胞脱落碎片，且细胞长满达到80％以上，吸走培养基，加入5ml的PBS+EDTA(0.02%)，迅速轻微晃动，竖立培养瓶，吸走，加入1ml0.05%胰酶，37度消化不超过3min，细胞完全消化脱壁，取出加入10ml培养基轻微吸打混匀，分装2瓶。
　　培养基：
　　MEM(GIBCO)+10%胎牛血清（杭州四季青）＋双抗