何时需做细胞系鉴定？需要“细胞身份证明”-细胞STR鉴定
发布时间：
2022-01-04
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在过去的几十年间，细胞生物学领域的文章一直在发表，科研成果一直在公布，但是，当中哺乳动物细胞被错误鉴定、存在交叉污染的情况也同时存在着。
首先，想问大家一个问题：认错了细胞系会造成什么后果呢?
稍微想一下，就知道后果很严重——
1、浪费时间和科研经费;
2、实验结果不可重复、科研结果不可靠;
3、会被学术期刊拒收或撤稿。
据统计，目前有超过30%的细胞系被错误辨识或受到交叉感染。
2010年《国际癌症杂志》(IJC)统计出一列表，在346篇文章中，有103篇存在细胞被Hela细胞污染的情况。
最可怕的错用是在瑞典某大学的一个研究组里，该研究组从1988年起就错误的使用了Hela，以为是lnt-407细胞系，并因此在从1988到2011年里发表了41篇论文，全部是错的。这些文章发在Oncogen,JBC，Carcinogenesis,PLoS One, J Cell Physiol, Cancer Res, Br J Cancer, Biochem J, Exp Cell Res等众多较好的杂志上。
图：Hela细胞
除了著名的Hela细胞外，在2001年，科学家在一篇论文里报道了一株新建立的大鼠视网膜神经节的细胞系，命名为RGC-5。在随后的十几年时间里，至少230篇论文的研究与假设是建立在这株细胞系上。结果在2009年，序列测定结果表明，RGC-5是一株小鼠(mouse)细胞。
2017年，武汉大学病毒学国家重点实验室发表了一篇文章，主题便是“278株常见人源肿瘤细胞系的交叉污染及错误鉴定”，该实验室采用STR分型方法进行细胞系遗传背景鉴定，结果得到了一个可怕的结果。
作者分别从国内28个研究机构搜集了278株常见人源肿瘤细胞系，其中国内建立的细胞系71株，国外建立的细胞系207株。
经STR鉴定后发现，来自于22个研究机构的128株细胞存在交叉污染/错误鉴定的情况，错误率高达46%。其中国内建立的细胞系占52株，
这表明了什么，国内建立的细胞系交叉污染/错误鉴定率竟然高达73.2%，并且67.3%(35/52)国内交叉污染/错误鉴定的细胞系结果被证实是Hela细胞或被Hela细胞部分污染的!
据统计，128株错误细胞系中，其中交叉污染细胞系占84.8%(108/128)，其余为错误鉴定细胞系。从国内/国外来源细胞的情况统计结果看，Hela细胞的绝对“搅屎棍”地位不容撼动!
所以，你需要“细胞身份证明”——细胞STR鉴定
近年来，大量研究表明STR 基因分型方法是进行细胞交叉污染和性质鉴定的最有效和准确的方法之一，STR 基因分型应用于细胞鉴定已被ATCC等机构强烈推荐，美国的ATCC细胞库、德国的DSMZ细胞库以及日本的JCRB细胞库等为STR 分型提供了各细胞株的数据供对比。
STR基因位点由长度为3~7个碱基对的短串连重复序列组成，这些重复序列广泛存在于人类基因组中，可作为高度多态性标记，被称为细胞的DNA指纹，其可通过PCR(聚合酶链式反应)来检测，STR基因座位上的等位基因可通过扩增区域内重复序列的拷贝数的不同来区分，在毛细管电泳分离之后可通过荧光检测技术来识别，随后通过一定的计算方法，即可根据所得的STR分型结果与专业的细胞STR数据库比对从而推算出样品所属的细胞系或可能交叉污染的细胞系名称。
何时需做细胞系鉴定？
1. 发表文章或申请课题经费前;
2. 使用细胞进行临床治疗(试验)前;
3. 准备冻存保种或已冻存多年的细胞;
4. 一个涉及到细胞试验项目开始/结束时;
5. 新得到的细胞或实验室培养5代以上的细胞;
6. 细胞系表现不稳定或结果与预期差别较大;
如何减少细胞系交叉污染？
1. 从信誉良好的组织或机构获得细胞系
2. 良好的文档编制方法
3. 训练有素的技术操作员
4. 每种细胞系单独使用培养基
5. 溶液或试剂分装使用
6. 常规性地注意细胞系身份以及其特性是否发生污染
7. 早期做好充足的冻存储备
8. 细胞培养代数不要太高
有了细胞STR鉴定，你的细胞也是有“身份”的细胞啦！而且科研成果更可靠，也不用担心发表科研文章时的细胞鉴定问题了，有没有感觉很强大、很安心呢!
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