RAW 264.7 (小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)到底怎样才能养好它呢？它太容易分化了！
发布时间：
2021-12-09
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养过RAW 264.7的小伙伴，
都容易为一个问题感到苦恼：
它太容易分化了！
到底怎样才能养好它呢？
今天就给大家分享一些心得。
养好RAW 264.7之基础篇
养好RAW 264.7的第一步，是要对它的基础培养条件了如指掌，比如生长特性、细胞形态、所需的培养基，甚至培养环境、传代比例等等，做到知己知彼，才能百战百胜。
细胞名称
RAW 264.7 (小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)
细胞别称
RAW264; RAW2647; RAW 264.7; RAW-264.7; Raw 264.7; RAW 264.7
种属
小鼠（雄性，成年BALB/c鼠）
组织来源
Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤
生长特性
贴壁细胞
细胞形态
不规则形（圆形、短梭形）
生长培养基
DMEM＋10% FBS＋1% P/S
培养环境
气相：95%空气；5%CO2 温度：37℃
推荐传代比例
1:3 - 1:6
冻存液配方
55% DMEM 40% FBS 5% DMSO
▲RAW 264.7生长图片
养好RAW 264.7之进阶篇1
除了基础条件，其他外界因素也容易引起细胞的“小脾气”，比如运输路上的颠簸、传代方法等等。针对几种常见的问题，来一 一为大家解答。
问题1 ：收货后，细胞不见了
总是会收到这类反馈：收到细胞，期待值满满地打开包装，但在显微镜下却找不到细胞！
这是因为RAW 264.7 细胞贴壁较松，快递运输路上受到颠簸，可能会脱落。脱落的细胞悬浮在培养基中不容易聚焦。
这时候不用担心，把细胞放进培养箱静置两个小时就可以看到了。
如果静置后看到的细胞仍偏少，请将瓶子里的培养基都转移到离心管里，1200rpm（约250g）离心3分钟，即可看到沉淀的细胞。
细胞全部脱落，慌乱之下可能会一个细胞都找不着。这个时候离心验证是最好的方法。
问题2 ：收货处理后，细胞不贴壁
将细胞离心收集，用新鲜的培养基重悬细胞放到新的培养瓶里之后，可能会出现细胞成团漂浮、不贴壁的情况。
这种情况下，把细胞离心收集，用1mL培养基重悬，慢慢地，轻轻地吹打，直到细胞被吹成单细胞，就可以重新铺板了。
RAW 264.7脱落后倾向于抱团，抱团时细胞是活着的，但很难贴壁。记得一定要把聚成团的细胞吹散成单细胞，不然细胞很难重新贴壁。
养好RAW 264.7之进阶篇2
正确的传代方法是养好RAW 264.7的关键，每一步操作都要细致入微，稍有不慎细胞就分化了。
RAW 264.7不能用胰酶消化，许多实验室用细胞刮传代，这是一种非常经典好用的方法。
在养RAW 264.7细胞这十几年里，摸索出一个更不错的方法：吹打传代。
吹打传代操作简单，对养细胞的萌新们更友好，也能更好地控制细胞分化率。
吹打传代步骤
01 轻拍几下培养皿
02 用1ml 的枪或者巴氏管把细胞吹下来（吹不下来的舍弃）
03 细胞吹下来后转移到15ml离心管
04 1200rpm(约250g) 离心3min
05 去上清，用新鲜培养基重悬细胞
06 按比例接种到新的培养皿中
吹打传代时机
01 吹打传代时机
02 当细胞密度较低的时候，可能不太好吹下来。
03 当细胞密度达到80%~90%的时候，最容易吹下。
▲推荐传代的密度
养好RAW 264.7之终结篇
讲了那么多如何处理RAW 264.7分化的情况，那分化了的细胞到底是什么形态呢？
分化的RA264.7
分化的细胞呈多角形，体积明显增大，时常有较长的黑色触角。
注意事项
1 RAW 264.7细胞三天不传代更容易分化，很难吹下，每一次接种密度都要控制好；
2 分化的细胞贴壁牢固，传代的时候请勿强制性吹下这些细胞，只接种容易吹下的那些未分化细胞；
3 吹打的力度一定要轻，切勿暴力吹打；
4 细胞的贴壁性和培养器皿的材料也有关，有时RAW 264.7 会出现太容易吹下的情况，连分化细胞都贴壁较松，此时更适宜用巴氏管吹打；
5 培养时，无法保证100% 不分化，通过传代可以将分化比例控制在一定范围；
6 RAW 264.7分裂活跃，记得每天看一看，周末也要抽点时间关心一下它哦~
养细胞不易，每个细胞对我们而言，都像是宝宝，含在嘴里怕化了，捧在手里怕摔了。
正是因为对科研的无畏坚持，让我们更有力量接受考验，因为科研本身，值得敬畏和付出。
RAW 264.7的起源
加利福尼亚索尔克研究所的W. C. Raschke在雄性BAB/14小鼠腹腔注射A-MuLV（Abelson鼠科白血病病毒）诱发肿瘤的腹水中建立了RAW 264细胞系。
他发现RAW 264可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖，并且能通过抗体依赖途径分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。
RAW 264.7不分泌A-MuLV（但用Moloney MuLV 拯救后可以在上清检测到病毒），对LPS非常敏感。该研究1978年发表在《CELL》杂志。
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