IBD动物模型构建攻略—吉妮欧生物技术实践
发布时间：
2025-03-18
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实背景
IBD研究与治疗的迫切需求
炎症性肠病（IBD）包括克罗恩病（CD）和溃疡性结肠炎（UC），全球患者超千万，病程迁延反复，10%患者最终进展为结肠癌。传统药物存在应答率低、副作用显著等问题，亟需更贴近临床病理特征的动物模型推动新药研发。
一、DSS诱导的IBD模型原理：靶向肠道屏障损伤与免疫失衡
1、基于IBD核心病理机制：
屏障破坏：炎症导致肠道上皮紧密连接蛋白降解
免疫失调：促炎因子（如TNF-α、IL-6）异常升高
菌群紊乱：致病菌易位激活固有免疫
2、实验材料体系
标准化造模流程
Step 1：DSS诱导急性结肠炎
▸自由饮用3% DSS溶液，持续7天；D8-D16给H4肽干预，D17取材。
▸建立典型症状：腹泻（第3天）、便血（第5天）
Step 2：模型评估
▸ 宏观指标：结肠长度测量、疾病活动指数（DAI）评分
▸ 微观评估
病理切片：隐窝结构破坏程度分级
免疫组化：ZO-1/Occludin蛋白表达检测
造 模 结 果
在DSS模型中，吉妮欧技术体系显示：
▶ 表型模拟成功：
• 实验组小鼠出现典型体重下降（15%-20%）、血便、结肠缩短
• 病理显示隐窝结构破坏、炎性细胞浸润
▶ 干预效果显著：
• H4肽治疗组结肠黏膜完整性恢复
• 紧密连接蛋白表达量提升2-3倍
• 炎性细胞浸润减少50%以上
结论与价值
01、成功构建DSS诱导型IBD模型，重现人类疾病核心特征
02、为IBD机制研究及药物筛选提供标准化平台
二、TNBS诱导的IBD模型原理：乙醇破坏黏膜，激活免疫反应，引发透壁性炎症。
Step 1：动物准备
▸选用6-8周龄雄性大鼠/小鼠（200-300g）
▸提前1周适应环境，实验前禁食12-24小时
Step 2：造模操作
▸每天固定10：00与18：00进行灌胃给药，每天两次，给药前1h禁食，持续31天
▸给药方案：
于D3、D10、D17、D24天采用45%无水乙醇联合TNBS（剂量阶梯递增至50mg/kg）灌肠造模。
Step 3：后续处理
▸恢复自由饮食，观察动物状态
▸按实验设计进行药物干预
Step 4：结果验证
▸ 生存率：生存情况，评估模型的严重程度
▸ 病理检测：肠道HE染色观察炎症
▸ 生化指标：检测TNF-α、IL-6等炎症因子
三、T细胞诱导的肠炎模型原理：CD4+CD45RBhigh T细胞移植到免疫缺陷小鼠后，因缺乏调节性T细胞而过度活化，引发肠道炎症。
Step 1：准备阶段
▸供体鼠：C57BL/6小鼠，提取脾脏的CD4+CD45RBhigh T细胞。
▸受体鼠：RAG2 KO小鼠（缺乏T/B细胞）
▸细胞纯化：磁珠分选确保高纯度CD4+CD45RBhigh T细胞。
Step 2：造模操作
▸细胞转移：向受体鼠尾静脉输注1×10⁵个CD4+CD45RBhigh T细胞。
▸炎症诱导：接触肠道抗原后被激活形成结肠炎性T细胞，分泌细胞因子，导致肠道严重炎症发生。
Step 3：结果验证
▸ 体重监测：记录每周体重情况。
▸ 粪便分析：观察粪便形态变化。
▸ 病理检测：HE染色评估肠炎损伤。
吉妮欧生物技术优势
1、精准模型构建
• 多模型选择：DSS急性/慢性模型、TNBS化学诱导模型、T细胞诱导模型、IL-10基因缺陷自发模型
• 表型标准化：建立DAI评分、组织病理分级等量化标准
2、多维评价体系
• 菌群-免疫互作分析（16S rRNA测序+流式细胞术）
3、全流程服务
• 从模型定制、药效评价到机制研究的完整解决方案
TNBS、DSS和T细胞三种不同方式
诱导的IBD模型该如何选择？
具体选择策略
研究急性炎症或药物筛选 → DSS模型
（快速、低成本）
研究克罗恩病样透壁炎症 → TNBS模型
（需注意品系敏感性）
探索T细胞或微生物调控机制 → T细胞转移模型
（需免疫缺陷鼠支持）
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