温针灸对兔膝骨关节炎模型表达的影响 明确温针灸抑制软骨细胞过度凋亡的途径
发布时间：
2022-06-30
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摘要
膝骨关节炎是由各种原因导致软骨细胞过度凋亡使正常软骨细胞数量减少、关节软骨自我修复受损，造成关节软骨损伤的一种退行性骨关节病。（推荐阅读：胶原诱导关节炎(CIA)啮齿动物模型、类风湿性关节炎(RA)模型、胶原诱导关节炎（CIA）啮齿动物模型、骨关节炎模型）
在正常稳态下，软骨细胞的增殖和凋亡处于平衡状态，起到维持软骨结构与功能稳定的作用。当软骨细胞过度凋亡时，内环境稳态被打破，软骨损伤加剧，导致膝骨关节炎的加速发展。
研究表明温针灸治疗膝骨关节炎的疗效确切，可改善软骨细胞凋亡状态4，但其作用途径不明确。P13K/Akt 信号通路对调控细胞凋亡发挥着重要作用5，该信号通路的激活及其下游因子Bcl-2、Bax表达的变化是影响软骨细胞凋亡的关键问。
因此，此次实验基于PI3K/Akt 信号通路，观察温针灸对兔膝骨关节炎模型 PI3K、Akt、Bcl-2、Bax 的表达的影响，明确温针灸抑制软骨细胞过度凋亡的途径。
背景
温针灸临床治疗膝骨关节炎疗效显著，但基础治疗机制尚未明确。
目的
观察温针灸对兔膝骨关节炎动物模型关节软骨中PI3K/Akt信号通路及其下游因子Bcl-2、Bax表达的影响。
方法
取6月龄新西兰兔40只，采用随机数字表法分为正常组、模型组、药物组、温针灸组，每组10只。模型组、药物组、温针灸组兔右后肢膝关节伸直位以石膏管型固定4周，制备膝骨关节炎模型。造模成功后，模型组每日置于兔架上固定15 min，药物组每天行硫酸氨基葡萄糖灌胃治疗（77mg/kg，1次/d），温针灸组每天行温针灸治疗（15 min/次，1次/d）。连续治疗28 d后，利用苏木精-伊红染色观察软骨损伤程度，Tunel法检测软骨细胞凋亡，RT-PCR法检测软骨组织中PI3K、Akt、Bcl-2、Bax的mRNA表达，Western blot法检测软骨组织中PI3K、Akt、Bcl-2、Bax的蛋白表达。
结果
①苏木精-伊红染色显示，模型组软骨细胞数量减少，细胞排列无序，层次紊乱，软骨面被破坏，Mankin评分显著升高;药物组与温针灸组软骨细胞数量明显增多，基质着色深，Mankin评分降低
②与正常组相比，模型组软骨细胞凋亡率增高（P<0.05）; 与模型组相比，药物组、温针灸组软骨细胞凋亡率降低（P< 0.05）
③RT-PCR与Western blot检测显示，与正常组相比，模型组PI3K、Akt、Bcl-2的mRNA与蛋白表达降低（P<0.05），Bax的mRNA与蛋白表达升高（P<0.05）∶与模型组相比，温针灸组与药物组PI3K、Akt、Bd-2的mRNA与蛋白表达升高（P<0.05），Bax的mRNA与蛋白降低（P<0.05）
④结果表明温针灸可通过调控PI3K/Akt信号通路引起下游因子Bc-2表达升高、Bax表达降低，进而抑制软骨细胞过度凋亡，达到保护关节软骨的作用。
关键词∶膝骨关节炎;温针灸;软骨细胞凋亡;PI3K/Akt信号通路;下游因子
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