AAV8介导的HBV感染大鼠模型建立研究有助于了解HBV感染的病理生理学、病毒复制

发布时间：

2022-03-31

来源：

专业提供(ATCC,DSMZ,RCB,JCRB细胞库源细胞、动物实验、CRO服务、SCI润色)

作者：

吉妮欧

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通过注射rAAV8-1.3HBV, HBV可在大鼠肝脏中持续复制并表达，并可引起肝脏损伤及纤维化的发生，该模型有助于了解HBV感染的病理生理学、病毒复制以及研究该过程中发生的肝细胞损伤、肝纤维化的相关机制

　　背景目的:
　　乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染是影响人类健康的重要问题，据WHO报道，全球约20亿人曾感染HBV，其中2.4亿人为慢性HBV感染者。我国作为乙肝的高流行区，2006年全国乙型肝炎流行病学调查显示我国一般人群HBsAg携带率为7.180l0，乙肝病毒携带者约有9000万人。慢性HBV感染可伴有肝纤维化发生，进而可发展为肝硬化、肝癌。目前尚没有特异的药物可以根治乙肝，动物模型对于了解HBV感染的病理生理学、病毒复制的相关机制以及该过程中发生的肝细胞损伤、肝纤维化，药物疗效评价等有重要意义。
　　肝纤维化的动物模型主要有化学法、胆总管结扎、免疫法、尾静脉注射转基因质粒等，但这些模型无法模拟HBV感染的自然史。HBV具有严格的宿主特异性，故目前尚缺乏合适的HBV动物模型。AAV 8作为一种嗜肝性病毒，其本身不具有致病性，可作为病毒载体携带HBV进入大鼠肝脏，本研究通过对大鼠注射rAAV8-1.3HBV，观察HBV在大鼠体内的复制以及引起的肝脏病变，旨在探索建立一种新型HBV感染动物模型，为进一步研完HBV复制、致病机制、肝纤维化进展等提供可育色。
　　方法:
　　本研完分别对0日龄乳鼠于0, 2, 4周腹腔注射rAAV8-1.3HBV以及对6周龄成年大鼠尾静脉注射rAAV8-1.3HBV建模。注射rAAV8-1.3HBV后于多个时间节点进行尾静脉采血100}200u1，分离血清，检测大鼠血清中HBsAg, HBeAg,ALT及HBVDNAa 12周末处死大鼠，取肝脏。做病理切片，行HE染色及Masson染色，免疫组化检测HBsAg, HBcAg, TGF-p1, a-SMA表达情况，评估肝脏损伤及纤维化情况。
　　结果:
　　乳鼠腹腔注射rAAV8-1.3HBV2周后血中HBsAg和HBeAg均为强阳性，感染率100%，除1只大鼠偏低外，HBsAg平均2686.31士 804.39 IU/ml, HBeAg平均63.60士31.60 NCU/ml, 4周时HBsAg和HBeAg较前呈下降趋势，8周和12周时仍有部分大鼠HBsAg和HBeAg保持阳性。对照组HBsAg, HBeAg12周内均为阴性。4周时实验组血中HBVDNA为1.39X 105}1.06X 10' IU/ml，随时间延长，至12周时血中仍可检测到较高拷贝的HBVDNA，表现为4.79X 1乎一3.31 X 1护IU/ml o肝脏中HBVDNA高于血清中HBVDNA。成年大鼠尾静脉注射rAAV8-1.3HBV后3天血中即可检测出HBsAg阳性，1周时HBsAg较前明显上升，2周后开始下降，至12周基本变为阴性。HBeAg结果与HBsAg表现不同，在注射后3天，rAAV8-1.3HBV组大鼠血中均未检%u}J }}l HBeAg，第2周时，HBeAg均为阳性，并保持稳定至12周。
　　对照组HBsAg, HBeAg12周内均为阴性。注射rAAV8-1.3HBV 8h后，血中可检测到极高拷贝数的HBVDNA，数值在3.47X 10}0}4.SX 10'0 IU/ml之间，24h时血中HBVDNA仍维持在10' 0数量级，从3天开始血中HBVDNA较前下降，但此时血中HBVDNA仍可保持很高的拷贝数，4周时血中HBVDNA为2.20X 103}1.12X 105 IU/ml，之后维持稳定至12周时。病理可见肝脏充血，部分肝细胞水肿，体积变大，排列紊乱，肝窦受压变窄，可见嗜酸性变及散在点状坏死，汇管区略增厚，可见淋巴细胞浸润。免疫组化可见HBsAg, HBcAg阳性肝细胞，a-SMA, TGF-田明显阳性，提示肝星状细胞活化，纤维化发生。
　　结论:
　　通过注射rAAV8-1.3HBV, HBV可在大鼠肝脏中持续复制并表达，并可引起肝脏损伤及纤维化的发生，该模型有助于了解HBV感染的病理生理学、病毒复制以及研究该过程中发生的肝细胞损伤、肝纤维化的相关机制。
　　关健词:动物模型，大鼠，乙肝