研究肝组织慢性乙型肝炎肝内ccDNA关系 探讨ccCDNA在CHB诊断和治疗中的重要临床价值
发布时间：
2022-03-16
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【主题】
慢性乙型肝炎肝内ccDNA定量测定的临床意义研究
【目的】
乙型肝炎病毒（HBV）感染的分子生物学研究表明，在 HBV持续性感染、治疗停止后病情反跳以及耐药方面，共价闭合环状 DNA（cccDNA）起着关键的作用。目前有关cccDNA 的了解多来源于土拨鼠和鸭乙型肝炎病毒动物模型的研究，但从病人中收集的资料很少，国内还未有相关报道。应用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）方法检测慢性乙型肝炎（CHB）肝组织HBVcccDNA 定量，研究肝组织 HBVcccDNA定量与组织及血清 HBV DNA定量、HBsAg滴度、肝实质损害程度及肝组织病理等的关系，以探讨 cccDNA 在 CHB 诊断和治疗中的重要临床价值。(推荐阅读：HBV模型、AAV/HBV诱导的慢性HBV感染啮齿动物模型)
【方法】
75例CHB患者均来自我院2004年1月~8月住院病人，男59例，女16例，年龄17～48岁，平均33岁。所有患者诊断符合2000年第十次全国病毒性肝炎学术会议修订的《病毒性肝炎防治方案》，并排除甲、丙、丁、戊型肝炎和其他原因所致肝损害。所有病例院外半年内未行抗病毒治疗，根据HBeAg的情况，分为HBeAg阳性慢性乙型肝炎和HBeAg阴性慢性乙型肝炎两组，两组资料在年龄、性别、病程等方面均具有可比性。10例非乙肝患者包括∶丙肝2例，自身免疫性肝炎1例，脂肪肝3例，酒精肝2例，不明原因肝损害2例作为对照。应用Rochelight-cycler荧光PCR检测仪检测肝组织cccDNA、组织和血清HBV DNA的拷贝数。
全自动生化分析仪检测肝功能（ALT等指标）、Roche全自动电化学发光免疫分析仪检测血清HBsAg滴度、肝组织进行炎症活动度分级（G）及纤维化程度分期（S）等，进行统计学分析。
【结果】
1.慢性乙型肝炎患者肝组织均检测到cccDNA，定量为1.56×10°拷贝/mg～3.04×10"拷贝/mg（对数值∶4.45±1.23）;肝组织HBVDNA定量3.12×10'拷贝/mg～2.34×10'拷贝/mg（对数值;4.89±1.29）;血清HBVDNA定量是3.95×10'拷贝/ml~5.34×10"拷贝/ml（对数值∶5.12±1.43）。
2.肝组织ccDNA定量与组织、血清HBW DNA定量的相关性;肝组织cccDNA定量与组织HBVDNA定量呈高度相关（对数值∶4.45±1.23与4.89±1.29，r=0.737，R0.001）;肝组织cccDNA定量与血清HBV DNA定量亦呈正相关（4.45±1，23与5.12±1.43，r=0.427，R0.005）。
3.HBeAg 阳性患者肝组织cccDNA定量（对数值∶5.33±1.17）、肝组织 HBVDNA 定量（对数值∶6.12±1.2）、血清HBVDNA定量（对数值∶6.50±1.56）高于HBeAg 阴性患者肝组织cccDNA 定量（对数值∶3.56±1.28）、肝组织HBVDNA 定量（对数值∶4.24±1.34）和血清HBVDNA定量（对数值∶4.34±1.64）;两两比较差异均有显著性（R0.05）。
4、血清HBsAg滴度均值;762±201.35COI。肝组织cccDNA定量与血清HBsAg 滴度的关系∶肝组织cccDNA定量与血清HBshg滴度呈正相关（r=0.718，P<0.005）。
5.肝组织cccDNA定量与肝实质损害指标血清谷丙转氨酶（ALT）、总胆红素（TBIL）、血浆凝血酶原时间（PT）均不具相关性（P>0，05）。
6.肝组织cccDNA定量与肝组织病理的关系;肝组织cccONA定量与肝组织炎症活动度《G）及纤维化程度（S）无明显关系。
【结论】
1.肝组织cccDNA 定量水平可直接反映体内 HBV 感染及复制情况，是较血清HBV DNA、HBeAg 更可靠的指标，存在 HBVcccDNA 是判断 HBV 感染的金标准，尤其在血清 HBV DNA 低至检测水平以下时，cccDNA 在 CHB 诊断和抗病毒治疗中具有重要临床价值和意义。
2.肝组织cccDNA定量与血清 HBV DNA定量呈正相关，在临床上动态检测慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA 负荷，有利于了解其肝组织 cccDNA负荷的变化∶但是由于乙型肝炎患者 HBV DNA和肝组织中cccDNA水平相关性不太强，不能通过血清HBV DNA 负荷来妄加推测肝组织 cccDNA 负荷水平。
3.HBeAg阳性患者肝组织cccDNA定量、组织和血清HBV DNA定量均比HBeAg阴性患者较高，证实了HBeAg是病毒在体内高度复制的指标之一;抗-HBeAg（+）表明病毒复制减弱，传染性降低，但抗-HBeAg（+）的病例仍可检出HBVDNA、ccDNA，仍有较强传染性和病毒复制力，也具有肝损伤持续存在，呈现慢性化或肝硬化的趋势。
4.肝组织cccDNA定量与血清HBsAg滴度相关性较强，血清HBsAg滴度可能在一定程度上反映肝组织cccDNA定量的状况。
5.肝组织cccDNA定量与肝实质损害程度与肝组织病理均不具相关性，cccDNA水平不能作为慢乙肝肝组织病变程度的预测指标，提示非细胞溶解机制清除cccDNA占一定地位。
【关键词】肝炎，乙型，慢性;荧光定量聚合酶链反应;肝炎病毒，乙型;cccDNA;肝功能;肝组织
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