吉妮欧提供ELISPOT分析检测服务助力疫苗研发

发布时间：

2024-12-23

来源：

吉妮欧

作者：

小吉

阅读数：

2635

ELIspot（酶联免疫斑点检测）是一种基于单细胞功能分析的生物检测技术，通过将活细胞接种于抗体包被的PVDF膜表面，利用固相抗体捕获分泌性细胞因子，经酶标二抗与显色底物反应后，在分泌位点形成可视化斑点。该技术兼具ELISA的高灵敏度与细胞培养的动态监测优势，可在单细胞分辨率水平定量分析淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-4等特异性细胞因子的功能活性，广泛应用于疫苗效力评估、肿瘤免疫监测及自身免疫疾病研究领域。

ELIspot（酶联免疫斑点检测）是一种结合细胞培养技术与酶联免疫吸附技术（ELISA）的实验方法，用于检测单个细胞分泌的细胞因子。该技术使用涂有特定抗体的膜来捕获细胞因子，通过酶联斑点显色的方式展示结果。

ELISpot 实验原理图来源于Janetzki S, Price L, Schroeder H, Britten CM, Welters MJ, Hoos A. Guidelines for the automated evaluation of Elispot assays. Nat Protoc. 2015 Jul;10(7):1098-115. doi: 10.1038/nprot.2015.068. Epub 2015 Jun 25. PMID: 26110715.

ELIspot 实验大致流程

1. 膜准备

使用PVDF膜为底的96孔板，包被特定的单克隆抗体。

2. 细胞培养

• 向孔内添加待检测的细胞和抗原刺激物进行培养。
• 在刺激下，细胞会分泌相应的细胞因子，这些因子被膜上的抗体所捕获。

3. 洗涤与检测

• 洗去细胞后，被捕获的细胞因子与生物素标记的第二抗体结合。
• 使用酶标记的亲和素与生物素结合，进行化学酶联显色，形成圆形斑点。

4. 数据分析

统计膜上斑点的数量，并将其除以初始细胞的总数，以计算阳性细胞的百分比。